za360問答ngkaiyan2013-0商7-14

dna複製過程中，兩條新生鏈都

只能從5‘端向3’端延伸

手

，前導鏈連續合成，滯後

鏈分段合成。這些

分段合成的新生dn

a片段稱岡崎片段。半不

連續（semidiscont

inuous）複製模型

，也就是說前導鏈上的合成是連續的，只有後滯鏈上的合成才是半連續的。這是因為細胞內都存在有

某判印舊德客危待

脫氧胸苷三磷酸（dttp）和脫氧尿苷三磷酸（dutp），而脫氧核糖核酸聚合

酶ⅲ（dna pol

ⅲ）並不能區分這兩者，因

布信研遠

此會將dutp加入到dn

採期松理控苗呢酸煙

a中，形成a·u對。但是在dna中並沒有u的存在！

因為大腸桿菌細胞

裡有雙重“保險”

田答節舊比

，防止了u的“混入”。第一道關是細胞裡的dutpase，它能使dutp變成dump，dump是不能

團煤數因免正

作為dna合成的底物

，這樣它就不再能加入dna中

。但總還有些漏網之“魚”，它們還是逃過此關，混入dna中，這就靠第二道關來清除“異己”，這道關的主角是尿嘧啶n-糖苷酶（uracil n-glycosylase），它可以切斷混合尿苷的糖苷鍵，形成無pu和py位點（apu

早衛科永鹽

rinic or apyrimidinic ，

顯知軸量教紹形

ap），再由ap內

載鎮看

切酶在ap位點切出一個缺口，進一步進行切除修復。在細胞

內尿嘧啶n-糖苷酶作用較快

，而ap酶作用較慢，在新鏈合成之初約1200bp就有可能摻進一個u，但很快就被尿嘧啶n-糖苷酶切

同戰互甲負張幹呢倒盡說

斷糖苷鍵，在ap酶未作用前在脈衝標記實驗中就提取

了，用naoh沉澱時，ap位

點十分易斷裂，所以前導鏈也成了小片段。

真核岡

崎片段的成熟機制比較

複雜，由polδ、rnaseh

i、fen1、dna2

和dna連線酶等

耐上獨夠史

多種蛋白質協同透過兩種機制

培萬航外亮知

加工完成。polδ的3′→5′

核酸外切酶活效能替代fen1

，在岡崎片段成熟中透過阻止過量的dna鏈替代合成，保證產生能被dna連線酶連線的具有單一切

口兩個dna片段，

始終是甜但迅2013-07-14

岡崎片段：相對比較短的dna鏈（大約10

00核苷酸殘基），是在dna

的滯後鏈的不連續合成期間生成的片段，這是r

eiji okaza

ki在dna合成實驗中新增放射性的脫氧核苷

酸前體觀察到的。

dna複製過程中，2條新生鏈都只能從5端向3端延伸，前導鏈連續合成，滯後

鏈分段合成。這些分段合成

的新生dna片段稱岡崎片段。

細菌岡崎片段長度10

00-2000核苷酸，真核生物岡崎片段長度100-200

正剛洋病源末燈

核苷酸。在連續合成的前導鏈中，u-糖苷酶和ap內切酶也會在錯配鹼基u處切斷前導鏈。

任何一種dna聚合酶合成方向都是從5‘向3’方向延伸，而dna模板鏈是反向平行的雙鏈，這樣在一條鏈上，dna合成方向和複製移動方向相同（前導鏈），而在另一條模板上卻是相反的（後滯鏈）。那麼在複製叉中新鏈是如何合成的呢？1968年岡崎（okazaki）及其同事進行了一系列實驗，回答了這一問題。

他們做了兩組實驗，一組是脈衝標記實驗（pulse-labeling experiment）。以e。coli為材料，在培養時，培養基中加入同位素［3h］標記的dttp，經30秒後，dna剛開始複製，分離dna，然後在鹼中沉澱，變性，讓新合成的單鏈和模板鏈分開，再用cscl密度梯度離心，以沉降的快慢來確定片段的大小，再檢測放射標記，結果表明被3h標記的片段，也就是新合成的片段，沉澱係數為20s左右，即都是長1000~2000nt的dna片段，而親本鏈要比它大20~50倍；第二組實驗是脈衝追逐實驗。目的是檢測早期合成的dna片段以後的命運又是如何的？是依然如舊的短片段，還是連線成了長片段。這個實驗是先進行標記培養30秒，以後除去同位素繼續培養幾分鐘，再分離dna在鹼中沉澱，檢測結果。先合成的（帶標記）的dna不再是短片段，而和總dna的情況相似，沉澱係數為70s~120s較長的片段，這意味著剛開始合成的片段都是短片段，以後再連線成長片段，人們就把最初合成的短片段稱為岡崎片段（okazaki fragment）。

5‘向3’指的是dna鏈的方向，其雙鏈反向平行，一條為5‘向3’，另一條3‘向5’

騎著白馬的猴哥2013-07-13

dna複製過程中，兩條新生鏈都只能從5‘端向3’端延伸，前導鏈連續合成，滯後鏈分段合成。這些分段合成的新生dna片段稱岡崎片段。半不連續（semidiscontinuous）複製模型，也就是說前導鏈上的合成是連續的，只有後滯鏈上的合成才是半連續的。這是因為細胞內都存在有脫氧胸苷三磷酸（dttp）和脫氧尿苷三磷酸（dutp），而脫氧核糖核酸聚合酶ⅲ（dna pol ⅲ）並不能區分這兩者，因此會將dutp加入到dna中，形成a·u對。但是在dna中並沒有u的存在！因為大腸桿菌細胞裡有雙重“保險”，防止了u的“混入”。第一道關是細胞裡的dutpase，它能使dutp變成dump，dump是不能作為dna合成的底物，這樣它就不再能加入dna中。但總還有些漏網之“魚”，它們還是逃過此關，混入dna中，這就靠第二道關來清除“異己”，這道關的主角是尿嘧啶n-糖苷酶（uracil n-glycosylase），它可以切斷混合尿苷的糖苷鍵，形成無pu和py位點（apurinic or apyrimidinic ，ap），再由ap內切酶在ap位點切出一個缺口，進一步進行切除修復。在細胞內尿嘧啶n-糖苷酶作用較快，而ap酶作用較慢，在新鏈合成之初約1200bp就有可能摻進一個u，但很快就被尿嘧啶n-糖苷酶切斷糖苷鍵，在ap酶未作用前在脈衝標記實驗中就提取了，用naoh沉澱時，ap位點十分易斷裂，所以前導鏈也成了小片段。

真核岡崎片段的成熟機制比較複雜，由polδ、rnasehi、fen1、dna2和dna連線酶等多種蛋白質協同透過兩種機制加工完成。polδ的3′→5′核酸外切酶活效能替代fen1，在岡崎片段成熟中透過阻止過量的dna鏈替代合成，保證產生能被dna連線酶連線的具有單一切口兩個dna片段，有利於保持基因組的穩定性