森嶼.2021.12.16 回答

構建表達載體時目的片段可以攜帶utr區的鹼基首先要用一定的限制酶切割質粒，使質粒出現一個缺口，露出黏性末端。然後用同一種限制酶切斷目的基因，使其產生相同的黏性末端（部分限制性內切酶可切割出平末端，擁有相同效果）。將切下的目的基因的片段插入質粒的切口處，首先鹼基互補配對結合，兩個黏性末端吻合在一起，鹼基之間形成氫鍵，再加入適量DNA連線酶，催化兩條DNA鏈之間形成磷酸二酯鍵，從而將相鄰的脫氧核糖核酸連線起來，形成一個重組DNA分子。如人的胰島素基因就是透過這種方法與大腸桿菌中的質粒DNA分子結合，形成重組DNA分子（也叫重組質粒）的。

2017.08.15 回答

可以的

很多時候你需要使用高保真酶進行擴增，而這類酶缺少在末端加a的功能，所以在pcr反應最後一步72度溫育8-10分鐘時，加入普通taq酶進行加a，然後連線t載體