克隆到一個基因,該基因和癌症有關係,如何設計實驗證明它是原癌基因還是抑癌基因?
- 2022-09-27
大致有這樣的一個模式,你可以根據你的具體情況來選擇。
1。回答這個基因是否與癌症的病理等級/分型、臨床分期、臨床預後等引數有關?
a。 如果已有該基因產物的抗體:
i。 病理切片——>免疫組化——>免疫評分——>統計分析
ii。 新鮮臨床標本——>Western blot——>結果分析
b。 如果沒有相應抗體: 收集臨床新鮮腫瘤組織標本——>RT-PCR——>結果分析
回答了第一個問題,就可以大致推斷該基因可能是癌基因或者抑癌基因。當然做到這一步還遠不能證實你的問題。如果你是碩士的話,做到這一步是可以接受的。如果是博士的話,你就需要繼續回答下面的問題。
2。 該基因對某癌症的腫瘤生物學有如何影響?
對該基因進行上調或者下調,然後觀察下面的現象
體外實驗 (多選):
a。 該基因如何影響了腫瘤細胞的生長/存活/增殖?細胞生長曲線/MTT、WST-1 /BrdU摻入實驗 等等
b。 該基因如何影響了腫瘤細胞的細胞週期?細胞週期分析
c。 該基因如何影響了腫瘤細胞的凋亡?凋亡分析(TUNEL法、Annixin V/PI雙染法)
d。 該基因如何影響了腫瘤細胞的遷移? 如:細胞劃痕實驗
e。 該基因如何影響了腫瘤細胞的侵襲轉移? 如:Transwell 實驗
體內實驗:
裸鼠體內成瘤實驗!
觀察腫瘤生長速度(體積、腫瘤);血管密度
其他,如:腫瘤細胞增殖、凋亡等
回答了第二個問題,可以基本瞭解該基因影響了腫瘤生物學的哪個方面。
基本上可以夠博士畢業。
但是如果你要求比較高,還可以考慮回答第三個問題。
3。 該基因透過何種機制來影響腫瘤生物學的某個方面。
這個問題需要根據你第二個問題的結果具體來看。就不詳說了。
以上只是我個人的一些建議,希望能使你有個大致的輪廓印象。