對未知蛋白進行鹽析沉時,需要先製作鹽析曲線,如何做實驗

  • 作者:由 匿名使用者 發表于 寵物
  • 2022-10-31

對未知蛋白進行鹽析沉時,需要先製作鹽析曲線,如何做實驗教育百科韓學長 2022-04-21

方法:1,過濾(0.45μm膜)或離心樣品(4°C 10000g)。2,溫和攪拌。逐滴加入鹽溶液,最高至50%飽和度。攪拌1小時。3,10000g離心20min。4,去除上清,用等體積相同濃度的鹽溶液(如不能溶解沉澱也不會造成進一步沉澱的溶液)洗滌重懸沉澱兩次。再次離心。5,使用少量體積後面步驟所需的低鹽溶液溶解沉澱。

對分離目的蛋白的鹽析,最好採用分段鹽析。x0d由於不同的蛋白質其溶解度與等電點不同,x0d沉澱時所需的pH值與離子強度也不相同,x0d改變鹽的濃度與溶液的pH值,x0d可將混合液中的蛋白質分批鹽析分開,x0d這種分離蛋白質的方法稱為分段鹽析法(fractional saltingout)。

如半飽和硫酸銨可沉澱血漿球蛋白,x0d飽和硫酸銨則可沉澱包括血漿清蛋白在內的全部蛋白質。x0d1。分段鹽析的條件先需要進行小實驗探索。

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