匿名使用者 1級 2017-12-26 回答

一般包括初染、媒染、脫色、復染等四個步驟，具體操作方法是：1）塗片固定。2）草酸銨結晶紫染1分鐘。3）自來水沖洗。4）加碘液覆蓋塗面染約1分鐘。5）水洗，用吸水紙吸去水分。6）加95%酒精數滴，並輕輕搖動進行脫色，20秒後水洗，吸去水分。7）蕃紅染色液（稀）染1分鐘後，自來水沖洗。乾燥，e5a48de588b63231313335323631343130323136353331333365633861鏡檢。

具體試驗 流程

1、 取載玻片用紗布擦乾，載玻片的一面用marker筆畫一個小圈（用來大致確定菌液滴的位置）。塗菌的部位在火焰上烤一下，除去油脂。 2、 塗片：液體培養基：左手持菌液試管，在酒精燈火焰附近5cm左右開啟管蓋；右手持接種環在火焰中燒灼滅菌，等冷卻後從試管中沾取菌液一環，在潔淨無脂的載玻片上塗直徑2mm左右的塗膜，最後將接種環在火焰上燒灼滅菌。固體培養基：先在載玻片上滴一滴無菌水，再用接種環取少量菌體，塗在載玻片上，使其薄而均勻。 3、 晾乾：讓塗片在空氣中自然乾燥。 4、 固定：讓菌膜朝上，透過火焰2-3次固定（以不燙手為宜）。 5、 染色：將固定過的塗片放報紙上，滴加草酸銨結晶紫液，染1min。 6、 水洗：用水緩慢沖洗塗片上的染色液，用吸水紙吸乾。簡單染色結束可觀察細胞形態。 7、 媒染：滴加1滴碘液，染1min，水洗。 8、 脫色：吸去殘留水，連續滴加95%乙醇脫色20-30s至流出液無紫色，立即水洗。 9、 復染：滴加蕃紅復染3-5min，水洗。至此，革蘭氏染色結束。

結果：革蘭氏陽性菌呈藍紫色，革蘭氏陰性菌呈紅色。

其重要的臨床意義在於：1。鑑別細菌 2。選擇藥物 3。與致病性有關：革蘭氏陽性菌能產生外毒素，革蘭氏陰性菌能產生內毒素；而內毒素主要是指革蘭氏陰性菌胞壁成分中的脂多糖，兩者的致病作用不同。

西格瑪 1級 2017-12-26 回答

革蘭染色過程所用四種不同溶液和作用： 1、 鹼性染料：這在簡單染色中已討論過，此處用結晶紫。 2、 媒染劑：其作用是增強染料與細菌的親和力，更好地加強染料與細胞的結合。常用的媒染劑是碘液。 3、 脫色劑：幫助染料從被染色的細胞中脫色。利用細菌對染料脫色的難易程度不同，而將細菌加以區分。革蘭陽性細菌不易被脫色劑脫色，而革蘭陰性細菌則易被脫色。常用的脫色劑是丙酮或乙醇，這裡所用的是95%的乙醇。 4、 復染液：也是一種鹼性染料，目的是使脫色的細菌重新染上另一種顏色，以便與未脫色菌進行比較。這裡用的是蕃紅花紅溶液。 革蘭染色的實驗步驟 1。 塗片：左手持菌液試管，右手持接種環，用接種環從試管培養液中取一環菌，於載玻片中央塗成薄層（事先在背面做好標記圓圈）即可，或先滴一小滴無菌水於載玻片中央，用接種環從斜面上挑出少許，與載玻片上的水滴混合均勻，塗成一薄層。 拔或塞試管塞時，應將試管口透過火焰略加燒灼，最後將接種環在火焰上燒灼滅菌。 2。 乾燥：塗片後在室溫下自然乾燥，也可在酒精燈上略加溫，使之迅速乾燥，但勿靠近火焰。 3。 固定：常用高溫進行固定。即手持載玻片一端，標本面朝上，在燈的火焰外側快速來回移動3~4次，共約3~4秒。要求玻片溫度不超過60℃，以玻片背面觸及手背面板不覺過燙為宜，放置待冷後染色。 固定的目的是： ① 殺死微生物，固定其細胞結構； ② 保證菌體能牢固地粘附在載玻片上，以免水洗時被水沖掉； ③ 改變菌體對染料的通透性，一般死細胞原生質容易著色。 4。 染色：將固定好的塗片放於報紙上，每次滴加一滴染液進行染色。 注意：乙醇脫色時滴加乙醇至流出液為無色立即進行水洗； 蕃紅復染由於時間較長，應在染液乾燥前補加染液； 鏡檢時吸水注意不要擦標本。 革蘭染色的實驗現象 如果將細菌做革蘭染色，凡染後菌體呈藍紫色的，稱為“革蘭陽性菌”；菌體是伊紅色，稱“革蘭陰性菌”。無論陽性菌還是陰性菌，都有桿菌和球菌。葡萄球菌、大腸桿菌、銅綠假單胞菌是臨床最為常見的病原菌，葡萄球菌屬於革蘭陽性菌，大腸桿菌屬於革蘭陰性菌中的腸桿菌科，除大腸桿菌以外，臨床較常見的腸桿菌科細菌還有變形桿菌屬，沙門菌屬、克黴白菌屬；銅綠假單胞菌是臨床常見的較耐藥革蘭陰性桿菌。