透過設計帶酶切位點的PCR引物來使目的片段新增限制性酶切位點的原理是什麼?百思不得其解,請教各位!

  • 作者:由 匿名使用者 發表于 舞蹈
  • 2022-08-03

透過設計帶酶切位點的PCR引物來使目的片段新增限制性酶切位點的原理是什麼?百思不得其解,請教各位!薄情的紅唇2021.12.31 回答

不是隨意新增。酶切位點都加在引物的5‘端。這樣在第一輪擴增後,就會產生有酶切位點的產物了(酶切位點在產物的兩端)。在接下來的擴增中每個產物就都會有了。PCR的時候可以耐受引物的5‘端由數個不匹配的鹼基對。但是隨著擴增的進行,產物都有這些位點後,就不存在不匹配的問題了

透過設計帶酶切位點的PCR引物來使目的片段新增限制性酶切位點的原理是什麼?百思不得其解,請教各位!匿名使用者2011.05.14 回答

原理很簡單,因為PCR擴增出來的產物都是你加進去的引物延伸出來的,所以PCR產物上都帶你加進去的酶切位點。Btw:雖然你覺得你加進去的引物量很少,但是你可以算一下,你加進去了多少mol的引物,再用這個量乘以你的PCR目的產物的分子量,就可以知道你理論上能等到的產物的量了。所以一般pcr反應體系里加入的引物的量都是過量的。

透過設計帶酶切位點的PCR引物來使目的片段新增限制性酶切位點的原理是什麼?百思不得其解,請教各位!匿名使用者2011.05.10 回答

我要知道就好了

透過設計帶酶切位點的PCR引物來使目的片段新增限制性酶切位點的原理是什麼?百思不得其解,請教各位!喀什葛爾胡楊2011.02.27 回答

不是隨意新增。酶切位點都加在引物的5‘端。這樣在第一輪擴增後,就會產生有酶切位點的產物了(酶切位點在產物的兩端)。在接下來的擴增中每個產物就都會有了。pcr的時候可以耐受引物的5‘端由數個不匹配的鹼基對。但是隨著擴增的進行,產物都有這些位點後,就不存在不匹配的問題了

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