洛克王子2017.10.20 回答

即使是2000V的電壓下都能做

拿了一個聚合物去測透射電鏡，那個老師不給測，說聚合物在電子束照射下會分解。但是我在文獻上就有看到過很多聚合物的透射電鏡圖啊。想問一下，透射電鏡的電子束能產生多高的溫度？聚合物的分解溫度大概低於多少度 。。。 聚合物可以看透射電鏡啊~~我得就不耐電子束，但是你可以和老師說一下，她會在銅網上給你加一層膜（具體是什麼就不太清楚了）。Dr_Jesse（站內聯絡TA）肯定可以看。橡膠填料的微相分散情況就是靠透射看的。 ，如分析聚合物中空微球時，切片，透射觀察內部情況cata（站內聯絡TA）肯定能測，聚合物核殼結構不就是透過投射電鏡嘛daiyuxi（站內聯絡TA）絕對可以測的，你那老師是不是在忽悠你啊tfyeszjwl（站內聯絡TA）可能是你們的儀器不能測，你換個地方測一下

精益求金2017.10.20 回答

透射電鏡標本製備方法

由於電鏡電子束穿透能力的限制，必須把標本切成厚度小於0。1um以下的薄片才適用，這種薄片稱為超薄切片。常用的超薄切片厚度是50-70nm。

在透射電鏡的樣品製備方法中，超薄切片技術是最基本、最常用的製備技術。超薄切片的製作過程基本上和石蠟切片相似，需要經過取材、固定、脫水、浸透、包埋聚合、切片及染色等步驟。

一 取材的基本要求

組織從生物活體取下以後，如果不立即進行適當處理，會由於細胞內部各種酶的作用，出現細胞自溶現象。此外，還可能由於汙染，微生物在組織內繁殖使細胞的微細結構遭受破壞。因此，為了使細胞結構儘可能保持生前狀態，必須做到快、小、準、冷：

（1）．動作迅速，組織從活體取下後應在最短時間內 （爭取在1分鐘內） 投入2。5%戊二醛固定液。

（2）．所取組織的體積要小，一般不超過1mm×1mm×1mm。也可將組織修成1mm×1mm×2mm大小長條形。因為固定劑的滲透能力較弱，組織塊如果太大，塊的內部將不能得到良好的固定。

（3）．機械損傷要小，解剖器械應鋒利，操作宜輕，避免牽拉、挫傷與擠壓。

（4）．操作最好在低溫（0℃～4℃）下進行，以降低酶的活性，防止細胞自溶。

（5）．取材部位要準確。

取材方法：將取出的組織放在潔淨的蠟版上，滴一滴預冷的固定液，用兩片新的、鋒利的刀片成“拉鋸式”將組織切下並修小，然後用牙籤或鑷子將組織塊移至盛有冷的固定液的小瓶中。如果組織帶有較多的血液和組織液，應先用固定液洗幾遍，然後再切成小塊固定。

二．固定

固定的目的是儘可能使細胞中的各種細胞器以及大分子結構保持生活狀態，並且牢固地固定在它們原來所在的位置上。固定的方法有物理的和化學的兩大類。物理的方法系採用冰凍、乾燥等手段來保持細胞結構；化學的方法是用一定的化學試劑來固定細胞結構。現通常使用化學方法對組織或細胞進行固定。

常用固定劑有：

1、四氧化鋨 （osmium tetroxide，）是一種強氧化劑，與氮原子有較強的親和力，因而對於細胞結構中的蛋白質成分有良好的固定作用。它還能與不飽和脂肪酸反應使脂肪得以固定。此外，四氧化鋨還能固定脂蛋白，使生物膜結構的主要成分磷脂蛋白穩定。它還能與變性dna以及核蛋白反應，但不能固定天然dna、rna及糖原。四氧化鋨固定劑有強烈的電子染色作用，用它固定的樣品圖象反差較好。鋨固定的時間一般為1-2小時。

2．戊二醛 （glutaraldehyde c5h8o2），戊二醛的優點是對糖原、糖蛋白、微管、內質網和細胞基質等有較好的固定作用，對組織和細胞的穿透力比四氧化鋨強，還能儲存某些酶的活力，長時間的固定（幾周甚至1～2個月）不會使組織變脆。

缺點是不能儲存脂肪，沒有電子染色作用，對細胞膜的顯示較差。

組織塊固定常規採用戊二醛—鋨酸雙重固定法。分預固定和後固定，中間用磷酸緩衝液漂洗。前固定用2。5%戊二醛固定2小時以上、後固定用1%鋨酸固定液固定1～2小時，ph7。3～7。4。

固定完畢，用緩衝液漂洗20分鐘後進行脫水。

三．脫水

為了保證包埋介質完全滲入組織內部，必須事先將組織內的水分驅除乾淨，即用一種和水及包埋劑均能相混溶的液體來取代水，常用的脫水劑是乙醇和丙酮。急驟的脫水會引起細胞的收縮，因此，脫水應剃度進行：70% 丙酮15分鐘，80% 丙酮15分鐘，90%丙酮15分鐘，100%丙酮１0分鐘（二次）。遊離細胞可適當縮短脫水時間。過度脫水不僅引起更多物質的抽提，而且會使樣品發脆，造成切片困難。