山人老施 2021-12-04

冰凍組織的取材，就是選擇好合適的組織塊，放在一個小的金屬託上進行速凍，凍到一定的硬度後，就在病理切片機進行切片。然後將切片放入酒精或者專有的固定液裡固定，最後進行相應的染色及封片。再蓋上蓋玻片，貼上病理號標籤，這樣一張冰凍切片就製作完成了。

維奇學姐 2021-12-04

冰凍切片技術

1。從鋒利的刀片開始

我發現使用新的鋒利的刀片時常常做出高質量的片子。我覺得在醫療場合中某些儘量省錢的做法顯得有些因小失大。一般我對每位患者的標本都使用一組新的刀片，當片子的質量開始下降時，我會立刻更換刀片。某些組織如質地較硬的膠原和鈣化組織會使刀片很快變鈍，因此，經常更換刀片顯得很有必要，有時候我在切片過程中要連續更換2-3次刀片。

2。坐著還是站著

我切片時總是坐在一張凳子上。要學會把刷子作為一種便捷的輔助工具來操作，從而精細地控制顯微厚薄程度的片子。切片時俯身彎腰，頸部過伸的姿勢有些不妥，要儘量處於放鬆和舒適的姿勢以便能最大程度控制你的左手。

3。刷子

我是一位刷子的使用者。我相信要想切好片子首先學會使用刷子。刷子的作用就在於粘住片子並把片子弄到臺子上。冷凍的片子會自發的捲縮並從刷子上脫離下來，因此，我使用一把有硬毛、夾取面寬的刷子。我發現來自中國的野豬毛十分堅硬，非常管用。你可以花3美元從工藝店買一把1/4英寸長的#2號扁平無色的刷子，把毛削成一個角度。由於是個有角的頭端，加上握持刷子成一定的角度，這樣刷子與組織接觸時就會象掃帚一樣的平。我不能理解為什麼有人使用脆弱的駱駝毛刷子，組織片很容易從這些柔軟的毛上掉下來。

4。握持刷子

左手象拿筆一樣握持刷子，將第五指輕壓於檯面上以穩定握筆的手（或根據手和切片機尺寸的大小置於你感覺合適的地方），這樣可以保證操作者動作的靈活及可控性。我把刷子削成一個角度，大致與左手握持刷子的角度相同，這樣使刷子平著接觸組織的1/4。

5。搖柄的旋轉

以連續均勻的力量轉動切片機的搖柄，且要毫不猶豫。我看到很多冰凍切片者手握著刷子在開始切片時總要停一下，緩慢的抓取組織，然後再開始轉動搖柄。依我的經驗看來，這種動作增加了起始切片假象的可能，會使片子的厚度不均勻，也增加了處理脂肪類組織的難度。我切片時，象前面所說的那樣手握刷子，以一種連續的動作抓取組織，這個動作與刀片接觸組織同時開始並貫穿於整個過程。

6。刷子的移動

組織塊移向刀片時刷子也要同步地向下移動，當組織塊剛好接觸刀片時刷子輕輕停在其底部2mm處並迅速抽離。正是刷子的向下移動使你能連續地抓取組織，當開始的幾毫米組織穿過刀片時便有自發捲曲的現象，這時，運動中的刷子立刻粘住其遊離的邊緣部分並水平地拖向切片者。刷子的運動路徑是一個朝下的“肘”形，然後再朝向你自己，連續不斷。但要注意有時候把組織壓向檯面時會使組織粘在臺面上，可能會導致碎片，應儘量避免。當然預先將組織包埋起來可以使刷子不用接觸到組織，切片也容易多了。

7。貼片

可以從切片機的檯面上也可直接從組織塊面貼上組織片，我一般採用前者。片子切好後，手持玻片在片子上方，向下以一個角度粘住片子的一角，在靜電作用下片子會吸附在玻片上並迅速融化。當然在周圍塗一些包埋物對貼片有利，這種多餘的包埋物可以保護片子的邊緣免受皺縮的損壞。有時候碰到貼片困難，我會在切到最後2mm包埋物的時候停下來，讓片子留在組織塊上，然後倒轉搖柄，使組織塊退離刀片，再用刷子從邊緣把組織片攤平，這樣就可以從組織塊面貼片了，這對捲曲的片子或者脂肪組織非常管用。

8。快速固定

我右手轉動搖柄也同時拿著玻片，片子一切好，立刻粘起片子並將它浸沒於固定液中。固定液需置於方便夠到的地方，我一般將染色架放在染色缸的旁邊，先將片子置於95%的乙醇溶液中固定，然後插於染色架上。如果組織固定延遲會出現風乾的假象，我的經驗是組織片還在切片機的檯面時，風乾效應很小，當組織片粘在有溫度的玻片上時就會出現明顯的風乾假象，表現為核的細節丟失及胞漿液的溢位。下面幾張圖片是延遲15秒固定和立刻固定的相同組織的比較，差異非常明顯。

9。切片的厚度

對於一般的手術病理我推薦切6um厚，這種厚度使染色更加飽滿，層次清晰，病理學家通常在2x 和 4x的放大倍數下可以獲得更多的資訊。太薄的片子在這種放大倍數下顯得蒼白，容易忽略一些細節。6um的片子可以有更多的時間去避免風乾假象，也會減少冰晶所造成的細胞核空洞。當然特殊情況下可能需要更厚或更薄的片子。

凝大喊大叫看 2021-12-04

1、把冷凍好的組織承載器裝到儀器的進退鍵上，手工旋轉旋鈕，觀察是否固定好。。 2、調好切片厚度，修片，修到需要的位置再切，恆溫冰凍切片機為較理想的冰凍切片機，切片機置於低溫密閉室內，切片時不受外界溫度和環境影響，可連續切薄片至5-20μm，一般切10um既可。。 3、切片時，低溫室內溫度以-15℃ ~ -22℃為宜，溫度過低組織易破碎，抗卷板的位置及角度要適當，載玻片附貼組織切片，切勿上下移動。。 注意：包埋劑的選擇，包埋劑是對冰凍切片的質粒是一個重要的影響因素，常規的包埋劑有OCT劑，B超耦合劑和普通的膠水；其中B超耦合劑適用於細胞豐富質地較嫩的組織，普通膠水和OCT劑適用於纖維豐富質地偏硬的組織。。 五、冰凍切片的注意事項

小安的仰望 2021-12-04

切片首先需要使用一些輔助的手套，外加就是一定要仔細一點，多練習，先從切一些簡單的食物開始，類似於蘿蔔和一些瓜果類，然後逐漸的鍛鍊，久而久之就能很好的切片了，加油哦！

令淼E7 2021-12-04

冰凍病理切片是指冰凍組織取材後，經過冰凍切片機冰凍大概3-5分鐘，冰凍切片機溫度大約在-20℃，3-5分鐘以後病理組織會被凍成較硬的實性組織，然後在冰凍切片機下進行切片，切片的厚度大約為5μm左右。冰凍切片機切好後，冰凍組織需進行染色，冰凍染色比常規染色方式更簡單快速，由於製片時間較短，其會損耗平時切片染色過程中較好的組織結構形態，組織結構形態相對難辨認，細胞變形較多。經過染色後，即為冰凍切片最後步驟封片，封片和常規組織切片相同，需進行塑膠封片，封片後冰凍切片即可在顯微鏡下觀察。