請問大家怎麼提取DNA

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請問大家怎麼提取DNA

作者：由匿名使用者發表于攝影
2022-10-28

舞191073889 2009-06-29

這種問題太深奧了

所以我從網上找了點資料，希望對你有所幫助。

一。DNA的提取方法簡介

為了研究DNA分子在生命代謝中的作用，常常需要從不同的生物材料中提取DNA。由於DNA分子在生物體內的分佈及含量不同，要選擇適當的材料提取DNA。

動植物中，小牛胸腺۰動物肝臟۰魚類精子，植物種子的胚中都含有豐富的DNA。

微生物中，穀氨酸菌體含7%~10%，麵包酵母含4%，啤酒酵母含6%，大腸肝菌含9%~10%。

從各種材料中提取DNA方法不同，分離提取的難易程度也不同。

對於低等生物。如從病毒中提取DNA 比較容易，多數病毒DNA 分子量較小，提取時易保持其結構完整性。

從細菌及高等動植物中提取DNA難度大一些。細菌DNA 分子量較大，一般達2×10 道爾頓。因此易被機械張力剪斷。細菌DNA，除核DNA 外，還有質粒DNA 等。

1、核酸的理化性質

RNA和核苷酸的純品都呈白色粉末或結晶，DNA則為白色類似石棉樣的纖維狀物。除肌苷酸、鳥苷酸具有鮮味外，核酸和核苷酸大都呈酸味。

DNA、RNA和核苷酸都是極性化合物，一般都溶於水，不溶於乙醇、氯仿等有機溶劑，它們的鈉鹽比遊離酸易溶於水，RNA鈉鹽在水中溶解度可達40g/L。DNA在水中為10g/L，呈黏性膠體溶液。在酸性溶液中，DNA、RNA易水解，在中性或弱鹼性溶液中較穩定。

天然狀態的DNA 是以脫氧核糖核蛋白（DNP）形式存在於細胞核中。要從細胞中提取DNA 時，先把DNP抽提出來，再把P除去，再除去細胞中的糖，RNA 及無機離子等，從中分離DNA 。

DNP和RNP在鹽溶液中的溶解度受鹽濃度的影響而不同。DNP在低濃度鹽溶液中，幾乎不溶解，如在0。14 mol/L的氯化鈉溶解度最低，僅為在水中溶解度的1%，隨著鹽濃度的增加溶解度也增加，至1mol/L氯化鈉中的溶解度很大，比純水高2倍。

RNP在鹽溶液中的溶解度受鹽濃度的影響較小，在0。14mol/L氯化鈉中溶解度較大。因此，在提取時，常用此法分離這兩種核蛋白。

2。細胞的破碎

細菌有堅硬的細胞壁，首先要破碎經胞。方

法有三種：①機械方法：超聲波處理法、研磨法、勻漿法；②化學試劑法：用SDS處理細胞； ③酶解法：加入溶菌酶或蝸牛酶，都可使細胞壁破碎。

由於高等動物DNA 主要存在於細胞核與線粒體中，所以提取時有兩個困難（高等植物與此類似）：

①破碎細胞難；從處死動物٠分離組織器宮到破碎細胞費時長。在此時期間DNA 可能會被DN ase降解，而動物組織：特別是肌肉組織很難破碎，即使是較易破碎的肝٠腎等組織也往往使用組織勻漿器，易造成DNA 斷裂。

②分子量大，一般比細菌的大2—3個數量級，比病毒的大4—5個數量。對不同生物材料，要根據具體情況選擇適當的分離提取方法。

3。DNA提取的幾種方法

（1）。濃鹽法

利用RNP和DNP在電解溶液中溶解度不同，將二者分離，常用的方法是用1M 氯納提取化鈉抽提，得到的DNP粘液與含有少量辛醇的氯仿一起搖盪，使乳化，再離心除去蛋白質，此時蛋白質凝膠停留在水相及氯仿相中間，而DNA位於上層水相中，用2倍體積95%乙醇可將DNA 鈉鹽沉澱出來。

也可用0。15 MNaCL液反覆洗滌細胞破碎液除去RNP，再以1MNaCL提取脫氧核糖蛋白，再按氯仿——-異醇法除去蛋白。

兩種方法比較，後種方法使核酸降解可能少一些。

以稀鹽酸溶液提取DNA 時，加入適量去汙劑，如SDS可有助於蛋白質與DNA 的分離。在提取過程中為抑制組織中的DNase對DNA 的降解作用，在氯化鈉溶液中加入檸檬酸鈉作為金屬離子的烙合劑。通常用。15MNaCL，0。015M檸檬鈉，並稱SSC溶液，提取DNA。

（2）。陰離子去汙劑法：

用SDS或二甲苯酸鈉等去汙劑使蛋白質變性，可以直接從生物材料中提取DNA 。由於細胞中DNA與蛋白質之間常借靜電引力或配位鍵結合，因為陰離子去汙劑能夠破壞這種價鍵，所以常用陰離子去汙劑提取DNA。

（3）。苯酚抽提法：

苯酚作為蛋白變性劑，同時抑制了DNase的降解作用。用苯酚處理勻漿液時，由於蛋白與DNA 聯結鍵已斷，蛋白分子表面又含有很多極性基團與苯酚相似相溶。蛋白分子溶於酚相，而DNA溶於水相。離心分層後取出水層，多次重複操作，再合併含DNA 的水相，利用核酸不溶於醇的性質，用乙醇沉澱DNA 。此時DNA是十分粘稠的物質，可用玻璃漫漫繞成一團，取出。此法的特點是使提取的DNA保持天然狀態。

（ 4）。水抽提法：

利用核酸溶解於水的性質，將組織細胞破碎後，用低鹽溶液除去RNA，然後將沉澱溶於水中，使DNA充分溶解於水中，離心後收集上清液。在上清中加入固體氯化鈉調節至2。6M。加入2倍體積95%乙醇，立即用攪拌法攪出。然後分別用66% ٠80%和95%乙醇以及丙銅洗滌，最後在空氣中乾燥，既得DNA樣品。此法提取的DNA中蛋白質含量較高，故一般不用。為除蛋白可將此法加以改良，在提取過程中加入SDS。