目的基因如何與受精卵染色體DNA整合
- 2022-12-05
既然是受精卵染色體DNA 那就是真核細胞
向原核細胞中匯入外源目的基因可以透過質粒,而在真核細胞質粒雖然可以匯入,但它的表達可能會出現問題,因為質粒是原核生物的DNA序列,而原核生物的DNA轉錄及翻譯機制與真核生物有很大不同
要將外源基因匯入到真核細胞的方法主要有
1、物理方法:(1)DNA直接注射法: 最簡單方法, 但注入量有限,表達成功率低
(2)顆粒轟擊技術:用金屬包被目的基因包,利用高壓發射裝置,促使包裹目的基因的金屬顆粒進入細胞,從而提高腫瘤細胞的轉化率。
2、化學方法:【用化學方法構建非病毒載體系統】
(1)脂質體載體:安全、簡單、低毒、無免疫原性等優點,效率較高
(2)受體介導法:靶向性好,但受體介導的內吞小泡易被溶酶體降解而造成目的基因表達時間短暫,表達效率低下
3、生物方法:【透過構建病毒載體來完成】
(1)逆轉錄病毒 (2)腺病毒 (3)單純皰疹病毒 (4)腺相關病毒 (5)其它病毒 如痘苗病毒、桿狀病毒等
匯入真核的外源基因的表達方式有兩種,
一種是瞬時轉染。這種瞬時表達是由一些強啟動子控制,使目的基因在真核細胞內瞬時強行表達,表達的過程無非還是轉錄翻譯。不過這種以環形質粒匯入細胞的瞬時轉染質粒很容易在複製時丟失。
另一種叫穩定轉染。這種一般是腺病毒載體或其他穩定轉染載體,他們是以線性方式整合到真核細胞基因當中,和真核基因一樣的表達,並擁有自己的啟動子,這種表達方式比較溫和,也會隨真核細胞的分裂而遺傳。
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