blkwbio2 2011-04-04

博凌科為解答：不需要做任何檢測，殘留在瓶壁上的明膠就已經足夠了。可以用PBS沖洗一遍後，再用含血清（10%）的培養液1ml沖洗一遍。你說那些顆粒是明膠顆粒，沒有關係的。最好還是按上述步驟沖洗一下。粗製的明膠中會混雜有不少細微的雜質，我認為你在顯微鏡下所觀察到的顆粒也有可 能就是這些物質。我們實驗室在高壓消毒前通常會將配好的明膠溶液先行濾過一下。並且，明膠鋪板後室溫放置30分鐘後即可將多餘的吸棄，不必放入培養箱裡過 夜。明膠在室溫下的確難溶，可以將其置於50-60度水浴中助溶，隨後立即正壓過濾。明膠包被好後如果不馬上使用，可以蓋緊瓶口放入無菌飯盒內4度冰箱短期存放，用 時PBS沖洗一下。還有，如果zbch 是在培養ESc，我建議你將明膠濃度該為２％。０．１％的明膠由於濃度低，對克隆的支援力較差，不能形成較大的克隆，並且ESc也容易發生分化。用0。5M的乙酸配製成1mg/ml的儲存液保存於-20度，用時用雙蒸水或PBS稀釋成0。1mg/ml，0。5-1ml 可塗布10個35mm培養皿。1、配製方法：（1）先配製0。5M乙酸（用雙蒸水配製，如600mg冰醋酸可配製20ml），0。22um濾膜過濾除菌（2）開啟包裝加入一定量的0。5M乙酸（如有5mg粉劑則加入5ml），封好後置於4度約1-2h即可溶解（3）以100ul/管分裝後保存於-20度2、塗膠方法：（1）取出一管儲存液，融化後稀釋成0。1mg/ml，即為1ml（2）一個培養皿塗布均勻後吸出至下一個培養皿（可儘可能減少使用體積，塗布一薄層即可），塗布完畢後置於37度培養箱中約1-2h以晾乾（可置於 消毒的飯盒中稍敞開一點培養皿蓋）（3）接種前用PBS沖洗三遍當然具體的使用量可根據你的需要來定，並可事先分裝儲存好裝過明膠的玻璃瓶如何清洗。